Johnny Test je jedenáctiletý chlapec, který bydlí pod jednou střechou se svými třináctiletými geniálními sestrami, Susan a Mary, které milují vědu. Dvojčata většinou používají svého bratra jako pokusného králíka během svých experimentů. Tím však téměř vždy způsobí nějaký problém, který pak musí sourozenci společnými silami zažehnat.